如何合理繪制ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線要點(diǎn)

許多ELISA試劑盒檢查都涉及到規(guī)范曲線的疑問(wèn)，規(guī)范曲線做的好與壞會(huì)直接影響到試驗(yàn)的結(jié)果，乃至是到試驗(yàn)的勝敗，那么終究怎么制造或制造規(guī)范曲線呢？

一、做規(guī)范曲線樣品檢查時(shí)有幾個(gè)疑問(wèn)需求留意

1、樣品的濃度等目標(biāo)是依據(jù)規(guī)范曲線計(jì)算出來(lái)的，所以首要要把做規(guī)范曲線看作是比做正式試驗(yàn)還要主要的一件事，不然后邊的試驗(yàn)結(jié)果無(wú)從談起。

2、設(shè)置規(guī)范曲線樣品的規(guī)范濃度規(guī)模要有一個(gè)對(duì)比大的跨度，而且要能涵蓋你所要檢查試驗(yàn)樣品的濃度，即樣品的濃度要在規(guī)范曲線濃度規(guī)模之內(nèi)，包含上限和下限。而對(duì)于呈S型的規(guī)范曲線，盡量要使試驗(yàn)樣品的濃度在中心斜度zui陡段，即曲線簡(jiǎn)直成直線的規(guī)模內(nèi)。

3、選用倍比稀釋法制造規(guī)范曲線中的規(guī)范樣品濃度，這么就能夠確保規(guī)范樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的違背。

4、檢查規(guī)范樣品時(shí)，應(yīng)按濃度遞加次序進(jìn)行，以削減高濃度對(duì)低濃度的影響，進(jìn)步準(zhǔn)確性。

5、規(guī)范曲線的樣品數(shù)通常為7個(gè)點(diǎn)，但zui少要確保有5個(gè)點(diǎn)。

6、做出的規(guī)范曲線相數(shù)因試驗(yàn)請(qǐng)求不同而有所變動(dòng)，但通常來(lái)說(shuō)，相數(shù)Rzui少要大于0.98，對(duì)于有些試驗(yàn)，zui少要0.99乃至是0.999.

二、挑選啥方程去擬合

在S曲線的低濃度部分能夠用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部分能夠用直線方程，中心部分可用對(duì)數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù)。免疫檢查時(shí)標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)(可所以倍比稀釋的，也能夠不是)濃度假設(shè)和相應(yīng)的吸光度(OD)值假設(shè)能夠出現(xiàn)直線當(dāng)然是zui抱負(fù)的了，這時(shí)能夠經(jīng)過(guò)EXELL等利便的取得擬合曲線，進(jìn)而推算出樣品的濃度值。

對(duì)于ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合辦法，直線、二次曲線、三次曲線、指數(shù)、對(duì)數(shù)等雖都可用于ELISA及其它生物學(xué)反響中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部分，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中心一段，而Logistic曲線則對(duì)曲線的悉數(shù)都有較好的合用性。在一個(gè)長(zhǎng)的區(qū)間內(nèi)，Logistic應(yīng)當(dāng)都能擬合得較為抱負(fù)。假設(shè)用來(lái)定量，S形曲線的中心段(較陡處)是對(duì)比好的，而兩真?zhèn)€平坦部分計(jì)算誤差會(huì)大，有時(shí)乃至?xí)艽蟆Ｓ糜诿庖邫z查的所謂“標(biāo)準(zhǔn)曲線”真實(shí)稱為擬合曲線對(duì)比適宜。目前國(guó)際上zui盛行的免疫檢查擬合辦法是“四參數(shù)邏輯擬合”，用這種擬合辦法通常能夠?qū)Ρ葴?zhǔn)確的反映濃度和吸光度的曲線，從而進(jìn)一步對(duì)比準(zhǔn)確的取得樣品中待測(cè)物質(zhì)的濃度值。但咱們做免疫檢查很少有時(shí)候能夠有這么抱負(fù)的情況，標(biāo)品濃度和相應(yīng)OD值通常是"S"型的曲線，這時(shí)就不能用直線擬合的辦法了，而對(duì)擬合辦法進(jìn)行挑選即是必要的了。紐帶在于你的標(biāo)準(zhǔn)曲線做到了S形的哪一部分，你想檢查的樣品濃度在曲線的哪一部分。當(dāng)然，假設(shè)用于定量，仍是在中心一段較好。但建模型是一回事，而用它來(lái)定量是另一回事。這些辦法當(dāng)然沒(méi)有一種辦法能夠通用，但也都能夠用。但并不是說(shuō)它即是的。事實(shí)上不僅是ELISA，其它良多生物學(xué)反響都是S形曲線，也都能夠用Logistic曲線擬合。

總結(jié)

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