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有關流式細胞術(Flow Cytometry，FCM)實驗步驟中的固定和通透化，你需要了解什么？

進行流式細胞術，如果你所有的靶標均在外表面表達，那么可使用活細胞。但當你靶向胞內蛋白時，需依次進行固定、通透細胞并用抗體和/或偶聯抗體對細胞進行免疫染色。

固定會交聯細胞中的大分子并將靶蛋白鎖定到位。通透化使抗體能夠進入胞內間隙。關于固定、通透化的實驗步驟，有一些注意事項。

- 1：

在www.cellsignal.cn 上可找到每種經流式細胞術驗證的抗體的建議固定和通透化實驗步驟。只需在搜索欄中輸入產品貨號便會看到產品頁。

- 2：

固定前，你的細胞需放在單細胞懸浮液中以確保讀數和分析準確。如果你的原始材料是黏附細胞或組織，那么你需要用胰蛋白酶或其他蛋白酶徹底分離細胞。一旦你獲得單細胞懸浮液，便可用各流式細胞術試管繼續進行固定、通透化和染色步驟，或者可以對大批量細胞進行固定和通透化，并將它們分裝，用于后續分析。

- 3：

對于許多抗體，建議的固定劑包括甲醛，也就是多聚甲醛的含水單體形態。在通透化前固定細胞有助于盡量減少靶蛋白的丟失并保留信號轉導狀態。這一點在諸如使用磷酸化特異性抗體來對信號轉導活動進行表征鑒定時尤為重要。

- 4：

固定后，確保徹底洗掉固定劑。這可避免細胞內的蛋白過度交聯，并消除抗體通過殘余固定劑與非特異性靶標交聯的風險。固定并清洗細胞后，便可以進行通透化。

- 5：

一些抗體需使用某種特定的通透化試劑，而另一些則在使用多種試劑時效果相當。你可以在cellsignal.cn 抗體產品頁上找到適合你的抗體的建議通透化試劑。CST經流式細胞術驗證、針對胞內靶標的抗體大部分都適合甲醇通透化。甲醇等溶劑可更容易地進入細胞核、線粒體和溶酶體等細胞器的內部。在某些情況下，甲醇會影響表位結構。這會對檢測產生積極或消極影響，具體取決于抗體和表位。皂素等去垢劑能更好地保留表位的天然結構，但可能無法更容易地進入。

總結

以上是生活随笔為你收集整理的bootstrap 悬浮固定_CST Tech Tips - 流式细胞术中如何固定和通透细胞？的全部內容，希望文章能夠幫你解決所遇到的問題。

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